МУК 4.1.2460-09 "Методы контроля. Химические факторы.

Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
2 февраля 2009 года

 

Дата введения:
29 апреля 2009 года

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И СМЫВАХ С КОЖНЫХ ПОКРОВОВ ОПЕРАТОРОВ
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2460-09

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации хлорантранилипрола в диапазонах соответственно 0,1 - 1,5 мг/куб. м; 0,2 - 3,0 мкг/смыв.

3-Бром-N-[4-хлор-2-метил-6-(метилкарбамоил)фенил]-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамид (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

C18H14BrCl2 N5O2 .

Мол. масса 483,15.

Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления 208 - 210

-12 -11

°С. Давление паров 6,3 х 10 Па при 20 °С; 2,1 х 10 Па при 25 °С.

Растворимость в органических растворителях при 20 °С (в г/куб. дм): ацетон

- 3,446; ацетонитрил - 0,711; диметилформамид - 124; дихлорметан - 2,476;

этилацетат - 1,144; метанол - 1,714; толуол - 0,32; н-октанол - 0,386;

н-гексан < 0,0001. Растворимость в воде при 20 °С (в мг/куб. дм): 0,972 (pH

4), 0,880 (pH 7), 0,971 (pH 9). Коэффициент распределения н-октанол/вода

Kow log P 2,76.

Агрегатное состояние в воздушной среде - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50 ) для крыс и мышей - более 5000

мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50 ) для крыс - более 5000 мг/кг;

острая ингаляционная токсичность (LC50 ) для крыс - более 5,1 г/куб. дм

(4 ч).

Область применения препарата

Хлорантранилипрол - инсектицид широкого спектра действия химического класса антранилдиамидов, рекомендуется к применению для защиты яблонь от плодожорки, листовертки, а также картофеля от колорадского жука.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) хлорантранилипрола в воздухе рабочей зоны - 1,5 мг/куб. м.

 

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

 

2. Метод измерений

Измерения концентраций хлорантранилипрола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование хлорантранилипрола из воздуха осуществляют на бумажный фильтр "синяя лента", экстракцию с фильтров проводят этиловым спиртом. Смыв с кожных покровов также проводят этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 95,76%, с поверхности кожи - 84,01%.

 

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

 

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с

переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США) Номер Госреестра

15311-02

Барометр-анероид М-67 ТУ 2504-1797-75

Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104

Колбы мерные 2-100-2 и 2-1 000-2 ГОСТ 1770

Меры массы ГОСТ 7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10; 15 куб. см ГОСТ 29227

Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10 куб. см ГОСТ 1770

Пробоотборное устройство ПУ-4Э исп. 1 (ЗАО "ОПТЭК", Номер Госреестра

г. Санкт-Петербург) 14531-03

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления

1 °С, пределы измерения 0 - 55 °С ТУ 215-73Е

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10,

250, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

 

3.2. Реактивы

Хлорантранилипрол, аналитический стандарт

с содержанием основного вещества 99,2%

(фирмы "Du Pont")

Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ-6-09-4326-76

Вода бидистиллированная, деионизованная или

перегнанная над KMnO ГОСТ 6709

4

Кислота орто-фосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552

Кислота муравьиная

Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995

Этиловый спирт (этанол) ректификованный ГОСТ Р 51652 или

ГОСТ 18300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

 

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78

Бумажные фильтры "синяя лента" обеззоленные ТУ 6-09-2678-77

Бязь хлопчатобумажная белая

Воронки конусные диаметром 30 - 37 мм ГОСТ 25336

Груша резиновая

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 куб. см ГОСТ 9737

Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм

Насос водоструйный ГОСТ 10696

Пробирки центрифужные ГОСТ 25336

Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi,

Швейцария

Стаканы химические низкие с носиком вместимостью

150 куб. см ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные емкости вместимостью 100 куб. см с

герметичной металлической крышкой

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм,

внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Spherisorb(R)

S5 ODS 2, зернением 5 мкм

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см,

внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100

С18, зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа

вместимостью 50 - 100 куб. мм

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

 

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

 

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

 

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

 

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.

 

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

 

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

7.2.1. Подвижная фаза N 1 (для анализа по п. 7.5.1.1) В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 350 куб. см бидистиллированной или деионизованной воды, 1,0 куб. см муравьиной кислоты, 650 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.2.2. Подвижная фаза N 2 (для анализа по п. 7.5.1.2) В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 450 куб. см бидистиллированной или деионизованной воды, 1,0 куб. см орто-фосфорной кислоты, 550 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

 

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку (п. 7.5.1.1 или п. 7.5.1.2) подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2.1 или п. 7.2.2) при скорости подачи растворителя соответственно 0,3 или 0,8 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

 

7.4. Приготовление градуировочных растворов
и растворов внесения

7.4.1. Исходный раствор хлорантранилипрола для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,0100 г хлорантранилипрола, добавляют 50 - 70 куб. см ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4.2. Раствор N 1 хлорантранилипрола для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора хлорантранилипрола с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 хлорантранилипрола для градуировки (концентрация 0,1 - 1,5 мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0; 10 и 15 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.1 или п. 7.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией хлорантранилипрола 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 1,5 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 7 дней.

 

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (относительные единицы) от концентрации хлорантранилипрола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки N 2 - 6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1.1 и п. 7.5.1.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более чем на 13,5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостный хроматограф "Perkin Elmer" (США) с ультрафиолетовым детектором

Рабочая длина волны 260 нм

Объем вводимой пробы 20 куб. мм

7.5.1.1. Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Spherisorb(R) S5 ODS 2, зернением 5 мкм

Температура колонки комнатная

Подвижная фаза метанол - вода - муравьиная

кислота (65:35:0,1, по объему)

Скорость потока элюента 0,3 куб. см/мин.

Ориентировочное время выхода

хлорантранилипрола 6,9 - 7,1 мин.

7.5.1.2. Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 5 мкм

Температура колонки комнатная

Подвижная фаза ацетонитрил - вода - орто-фосфорная

кислота (55:45:0,1, по объему)

Скорость потока элюента 0,8 куб. см/мин.

Ориентировочное время выхода

хлорантранилипрола 7,9 - 8,1 мин.

Линейный диапазон детектирования

хлорантранилипрола 2 - 30 г.

 

7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Диаметр бумажного фильтра "синяя лента" должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом порциями 25 - 30 куб. см, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

 

7.7. Подготовка салфеток для проведения смыва

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 х 10 см, последовательно обрабатывают их 5%-ным раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

 

8. Отбор и хранение проб воздуха

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 1 - 4 куб. дм/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации хлорантранилипрола на уровне предела обнаружения (0,1 мг/куб. м) необходимо отобрать 5 куб. дм воздуха, на уровне 0,5 ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,7 куб. дм. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 4 - 6 °С - 7 дней.

 

9. Условия проведения смыва

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, спина, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его с целью удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 кв. см). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв проводят способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 куб. см в стеклянную емкостью с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают кожный покров сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильной камере при температуре -18 °С - 30 дней.

 

10. Выполнение измерений

 

10.1. Воздушная среда

Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 куб. см, заливают 20 куб. см этилового спирта, помещают на встряхиватель на 10 минут. Растворитель сливают, фильтр обрабатывают новыми порциями этилового спирта объемом 10 куб. см еще дважды, выдерживая на встряхивателе по 10 минут.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 куб. см подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2.1 или 7.2.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.1 или 7.5.1.2.

 

10.2. Смывы с кожных покровов

Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 куб. см, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2.1 или 7.2.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.1 или 7.5.1.2.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию хлорантранилипрола в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,5 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой.

Перед анализом опытных образцов проводят хроматографирование холостых (контрольных) проб-экстрактов неэкспонированного фильтра и салфетки.

 

11. Обработка результатов анализа

 

11.1. Воздушная среда

Массовую концентрацию хлорантранилипрола в пробе воздуха X, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:

 

                                        W
                                X = C х --,
                                        V
                                         t
    где:
    C  -  концентрация  хлорантранилипрола  в  хроматографируемом растворе,
найденная  по  градуировочному  графику  в соответствии с величиной площади
хроматографического пика, мкг/куб. см;
    W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
    V   -  объем  пробы  воздуха,  отобранный  для  анализа,  приведенный к
     t
стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С), куб. дм.
                                          u х t
                         V  = 0,386 х P ---------,
                          t             (273 + T) 
где:
T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °С;
P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;
u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;
t - длительность отбора пробы, мин.                          _
    За результат анализа (X) принимается среднее арифметическое результатов
                                              (X  + X )
                                          _     1    2
двух  параллельных  определений  X  и X  (X = ---------), расхождение между
                                  1    2          2
которыми    не   превышает   значений   норматива   оперативного   контроля
сходимости (d): 
                              |X  - X | <= d;
                                1    2
                                    _
                                    X
                        d = d    х ---, мг/куб. м,
                             отн   100
    где:
    d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;
    d    - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 14%).
     отн

11.2. Смывы с кожных покровов

Массовую концентрацию хлорантранилипрола в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

 

X = C х W,

где:

C - концентрация хлорантранилипрола в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации хлорантранилипрола в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

 

12. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

результат анализа X в мг/куб. м или мкг/смыв (с указанием площади смыва
в  кв. см),  характеристика  погрешности дельта,  % (+/- 25%), Р = 0,95 или
_
X +/- ДЕЛЬТА, мг/куб. м (мкг/смыв,  площадь  смыва,  кв. см), Р = 0,95, где
ДЕЛЬТА - абсолютная погрешность.
                                  _
                         дельта х X
                ДЕЛЬТА = ----------, мг/куб. м (мкг/смыв).
                            100

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание хлорантранилипрола в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,1 мг/куб. м; смыва - менее 0,1 мкг/смыв" <*>.

--------------------------------

<*> 0,1 мг/куб. м; 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 5 куб. дм воздуха рабочей зоны; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 кв. см) соответственно.

 

13. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

 

14. Разработчики

ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора".